超凈工作臺在胡蘿卜愈傷組織建立實驗中的應用

一、 材料和設備

超凈工作臺或者無菌接種室

培養基 N6+2 mg/L 2,4-D

帶有吸水紙的成套的培養皿，無菌水/解剖刀、槍型鑷子、刀片

無病蟲的胡蘿卜直根數十個

消毒劑 0.2%的升汞溶液

70%酒精、95%酒精及70%的酒精棉球

l000毫升的玻璃燒杯數個、酒精燈、火柴、記號筆、小刷子(可用一次性牙刷)

二、實驗材料 新鮮胡蘿卜、胡蘿卜愈傷組織

三、實驗步驟'

1 選擇無傷、無病、形狀較規則的胡蘿卜，用小刷子在流動的自來水下洗刷胡蘿卜，除凈表面所有的泥屑。可以根據實驗的時期，選用其它的實驗材料。

2 將胡蘿卜切成大約 40 mm厚的片段,放入100或500 ml的燒杯中，倒入消毒液，將植物材料覆蓋、浸泡10-30 min。在滅菌過程中，在每個材料上做好標記，并對應地放在預接種的培養基邊上。接種后在培養瓶上標明培養物名稱和培養日期。

3 在超凈工作臺上，倒掉消毒液，用無菌水沖洗3-5次，以便去除殘留的消毒液。

4 取消毒過的胡蘿卜放入已滅菌的帶有濾紙的培養皿中，用無菌解剖刀從兩端各切去10毫米，再將留下的胡蘿卜直根切成一系列一毫米厚的橫切片。取其中的一片轉到另一個已滅菌的帶有吸水紙的培養皿中，再將每一片切成小塊，使其每個小塊上均包含木質部、形成層和韌皮部，外植體的大小要盡量一致。

5 接種 取下培養瓶的塞子(或錫鉑紙)，用火灼燒瓶口2 cm處，手持培養瓶呈45o角，用消毒鑷子把4-8塊外植體轉到瓊脂培養基的表面，注意把靠近根尖的一面接觸培養基。然后立即將燒過的封口棉塞或錫鉑紙封住瓶口。每兩次轉移之間都要用酒精燈灼燒鑷子，防止帶菌。

6 培養 接種好的外植體在25℃的培養箱中，黑暗條件下培養四周左右就會形成一塊較大的愈傷組織。